You are viewing an incomplete version of our website. Please click to reload the website as full version.

邻位连接技术:一种识别蛋白质之间相互作用的简单蛋白质组学技术

分子 A 和 B 相互作用吗?

这是一个在某些情况下可以为细胞生物学家提出重大挑战的非常简单的问题。

识别蛋白质之间相互作用的传统方法包括双杂交技术和免疫共沉淀等各种复杂实验。虽然这些方法能够提供检测相互作用的机会,但它们有几个众所周知的固有局限性。

识别蛋白质之间相互作用的传统方法包括双杂交技术和免疫共沉淀等各种复杂实验。虽然这些方法能够提供检测相互作用的机会,但它们有几个众所周知的固有局限性。

邻位连接技术 (PLA) 是研发人员工具箱中的又一敏感、简单原位工具,它可以帮助提供蛋白质之间相互作用的洞察。

什么是邻位连接技术?

邻位连接技术是基于抗体的传统亲和蛋白质组学技术和现代分子生物学之间的原位连接。

邻位连接技术的卡通演示由 Abnova
Cartoon representation of a proximity ligation assay, courteously provided by Abnova

在邻位连接技术中:

  • 一对抗体识别并结合潜在相互作用的目标
  • 这些抗体结合形成一对匹配的短单链寡核苷酸(标记 + / -)。
  • 如果两个独立目标相互作用,此时仍处最邻位,寡核苷酸探针将与另两个“寡核苷酸连接子”杂交和连接,从而形成连续环形 DNA 结构。
  • DNA 聚合酶将通过简单、可靠的滚环扩增,将这些环形分子扩增。
  • 获得的这些高度扩增的环形 DNA 分子可采用标准荧光法检测,并可作为两个蛋白质之间相互作用的定性标记物。

    使用抗体对 ABIN1340024 执行的邻位连接技术的代表图像

    为什么使用 PLA?

    在用于识别蛋白质之间相互作用的简单方法中,没有任何方法能提供绝对的金标准,每种方法都有自己的优势和局限性。研究蛋白质之间相互作用的研究人员往往会开展若干不同的竞争性实验,以便通过多种途径来显示同一相互作用。

    PLA 是一种识别蛋白质之间相互作用的有力方法,因为它:

  • 简单 - 邻位连接技术无需数周的分子克隆或优化来建立和执行。它们仅需具有良好的探针和良好的抗体。
  • 灵敏 - 邻位连接技术直接在固定细胞和组织切片中进行。研究人员可以标记在自然条件下天然蛋白质中相互作用的特点。邻位连接技术无需研究人员破坏细胞或从组织中提取蛋白质成分来识别蛋白质之间的相互作用,还可以使用其他标签和标记来同时识别其他变量。
  • 注: Y您可以登录 antibodies-online 查找数百种获准用于邻位连接技术实验中的高品质一抗和 一抗抗体对 !

    结论

    邻位连接技术是一种用于识别原位蛋白质之间相互作用的简单、定性方法。此方法还被选择用来识别翻译后修饰,如磷酸化。

    若正确利用并清楚邻位连接技术的优势和局限性,则 PLA 可为希望更全面了解细胞动力学和蛋白质相互作用的科研人员提供又一强大工具。